LwCas13a 酶產(chǎn)品特性:
1.作用機(jī)制:LwCas13a(C2c2)核酸酶是依賴(lài)于RNA介導(dǎo)的內(nèi)切核酸酶,在靶標(biāo)RNA存在PFS序列的情況下,在單鏈向?qū)NA引導(dǎo)下與靶RNA特定位點(diǎn)結(jié)合并切割。同時(shí),它識(shí)別并切割靶標(biāo)RNA時(shí),會(huì)釋放出強(qiáng)大的非特異性單鏈RNA反式切割活性,可高效切割體系中任意單鏈RNA。
2.來(lái)源與活性:該酶來(lái)源于Leptotrichiawadei(Lwa)菌株,在37-42℃中具有很好的活性。
3.應(yīng)用前景:由于具有上述特性,LwCas13a作為一種新型的檢測(cè)工具在分子診斷方面具有應(yīng)用前景,例如被用于靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā),像broad研究所的張鋒團(tuán)隊(duì)便利用其開(kāi)發(fā)了名為“sherlock”的產(chǎn)品。
1.常規(guī)儲(chǔ)存:一般存儲(chǔ)于-20℃、干燥、避光條件。
2.特殊組分儲(chǔ)存:
controltargetrnaandcrrna:應(yīng)保存于-80℃并避免反復(fù)凍融,必須在6個(gè)月內(nèi)使用,使用時(shí)建議取0.5μl至每20μl反應(yīng)體系。
ssrnareporter(fam-bhq1):應(yīng)避光保存于-80℃并避免反復(fù)凍融,必須在6個(gè)月內(nèi)使用,使用時(shí)建議取0.5μl至每20μl反應(yīng)體系。
3.復(fù)溶后儲(chǔ)存:將凍干Cas13a用純水溶解,濃度>100μg/ml,稀釋至工作濃度后,避免反復(fù)凍融,復(fù)溶后4℃可穩(wěn)定儲(chǔ)存7-10天;短期保存請(qǐng)分裝后存放于-20℃。
